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ATCC
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ATCC HTB-22(MCF7), MCF-7, 人乳腺癌細(xì)胞
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CM McGrath
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人
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**；乳腺
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乳腺癌；胸水
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上皮細(xì)胞樣
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貼壁生長(zhǎng)
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MEM培養(yǎng)基(MEM，GIBCO，貨號(hào)41500034)，90%；FBS，10%。
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HTB-22
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氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,
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1：2至1：6，每周2次。
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90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲(chǔ)存
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陰性
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1
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該細(xì)胞可以作為轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。
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Amelogenin: X
CSF1PO: 10
D13S317: 11
D16S539: 11,12
D5S818: 11,12
D7S820: 8,9
THO1: 6
TPOX: 9,12
vWA: 14,15
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AK-1, 1
ES-D, 1-2
G6PD, B
GLO-I, 1-2
PGM1, 1-2
PGM3, 1
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Nucleotide (GenBank) : U26553 Human calcitonin receptor mRNA, complete cds.
Nucleotide (GenBank) : U26554 Human calcitonin receptor isoform mRNA, complete cds.
Nucleotide (GenBank) : U63917 Human G protein coupled receptor (GPCR-Br) mRNA, complete cds.
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Sugarman BJ, et al. Recombinant human tumor necrosis factor-alpha: effects on proliferation of normal and transformed cells in vitro. Science 230: 943-945, 1985. PubMed: 3933111
Takahashi K, Suzuki K. Association of insulin-like growth-factor-I-induced DNA synthesis with phosphorylation and nuclear exclusion of p53 in human breast cancer MCF-7 cells. Int. J. Cancer 55: 453-458, 1993. PubMed: 8375929
Brandes LJ, Hermonat MW. Receptor status and subsequent sensitivity of subclones of MCF-7 human breast cancer cells surviving exposure to diethylstilbestrol. Cancer Res. 43: 2831-2835, 1983. PubMed: 6850594
Lan MS, et al. Polypeptide core of a human pancreatic tumor mucin antigen. Cancer Res. 50: 2997-3001, 1990. PubMed: 2334903
Pratt SE, Pollak MN. Estrogen and antiestrogen modulation of MCF7 human breast cancer cell proliferation is associated with specific alterations in accumulation of insulin-like growth factor-binding proteins in conditioned media. Cancer Res. 53: 5193-5198, 1993. PubMed: 7693333
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ATCC HTB-22(MCF7)人乳腺癌細(xì)胞特點(diǎn)和簡(jiǎn)介
MCF-7細(xì)胞保留了多個(gè)分化了的乳腺上皮的特性，包括：能通過(guò)胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成圓形復(fù)合物（domes）。 該細(xì)胞含有Tx-4癌基因。 腫瘤壞死因子α（TNF alpha）可以抑制MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)。 抗雌激素處理細(xì)胞能調(diào)變IGFBP’S的分泌。 在本庫(kù)通過(guò)支原體檢測(cè)。 在本庫(kù)通過(guò)STR檢測(cè)。
ATCC HTB-22(MCF7)人乳腺癌細(xì)胞接受后處理
1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液 ，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng) 基。
5) 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián) 系。
ATCC HTB-22(MCF7)人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基 混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜） 。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作 臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后， 加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清 和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液 ，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記 錄凍存管位置以便下次拿取。
ATCC HTB-22(MCF7)人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生 請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞 因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn) 題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān) 。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼壁，若細(xì)胞 仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再 次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活 力，請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜?費(fèi)寄送一次。
4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度 80%左右時(shí)正常傳代。
5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時(shí) 可以 一定比例和客戶(hù)自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技 術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。
7.該細(xì)胞僅供科研使用。
